分離純化是農(nóng)藥分析必不可少的過(guò)程，不管是商品農(nóng)藥樣品還是殘留農(nóng)藥樣品都不是純的農(nóng)藥成分。

對(duì)于農(nóng)藥樣品的分析，首先要進(jìn)行一定的分離純化步驟，使農(nóng)藥和雜質(zhì)盡可能分離，達(dá)到分析結(jié)果準(zhǔn)確的目的。

不同的農(nóng)藥樣品有不同的純化方法。選擇分離方法的依據(jù)是樣品中農(nóng)藥的性質(zhì)和雜質(zhì)的性質(zhì)差別來(lái)選擇分離純化的方法

農(nóng)藥分離的主要類別

原藥分析：各種農(nóng)藥異構(gòu)體及有效成分含量。

殘留分析：土、水、動(dòng)植物體中農(nóng)藥殘留量分析。

原藥的一般組成

原藥（固體）：含填料，加工成粉劑，可濕粉劑顆粒時(shí)加入。

加入目的：原藥粉，不易粉碎；農(nóng)藥藥效高,單位面積用量少，加入填料后易稀釋。

加入成分：藥石、粘土、碳酸鹽類。

原藥（液體）：含溶劑、助劑、乳化劑、非有效成分（合成副產(chǎn)物、降解成分等）。

原藥分析與殘留分析比較

原藥分析對(duì)象：主要對(duì)有效成分分析。

原藥分析的特點(diǎn)：含量高，有固定的提純與分析方法。

殘留分析對(duì)象：對(duì)人、畜、環(huán)境有害成分。

殘留分析特點(diǎn)：殘留量少，組成復(fù)雜。要提取、富集，分離提純。分離提純與分析方法靈活多樣。

共同點(diǎn)：基本原理和方法一致。

分離提純（富集）——物理和化學(xué)方法；

分析類別：定性分析、定量分析

固體農(nóng)藥的純化方法簡(jiǎn)介

 固體農(nóng)藥（有效成分）制標(biāo)準(zhǔn)樣時(shí)用重結(jié)晶法提純。

提純?cè)恚涸谀骋环N溶劑中，固體農(nóng)藥的溶解度隨溫度變化有較大的變化。在較高溫度時(shí)的飽和溶液趁熱過(guò)濾除不溶性雜質(zhì)。母液放冷，在較低溫度時(shí)農(nóng)藥以晶體析出，過(guò)濾，可溶性雜質(zhì)留在母液中而除去。

（可反復(fù)重結(jié)晶直到提純農(nóng)藥熔點(diǎn)不變?yōu)橹梗?/span>

重結(jié)晶的關(guān)鍵因素

關(guān)鍵：選合適溶劑。

重結(jié)晶溶劑具備條件：

a.不與被提純成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)

b.被提純物與雜質(zhì)要有顯著溶解度差

c.被提純物在該溶劑中溶解度隨溫度變化變化大

d.溶劑沸點(diǎn)適中（不高也不低）

如沒(méi)有合適的純?nèi)軇﹦t用混合溶劑重結(jié)晶。

混合溶劑的選擇方法

1、確定兩種溶劑可以互相混溶，而且一種是被提純農(nóng)藥的良好溶劑，一種是不良溶劑。

如乙醇和水；苯和乙醇；丙酮和三氯甲烷等。

2、取0.02g—0.03g樣品溶解于一定量（1mL）的良好溶劑中（試管），然后在不斷搖動(dòng)下緩慢滴加不良溶劑，直到出現(xiàn)渾濁為止

3、記下不良溶劑的體積，計(jì)算得到混合溶劑的組成比例，通過(guò)重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整

重結(jié)晶的一般操作步驟

1、制成飽和熱溶液（接近溶劑的沸點(diǎn)）

2  熱過(guò)濾（除不溶雜質(zhì)）

3、自然冷卻結(jié)晶

4、過(guò)濾晶體與洗滌。

5、干燥　

6、標(biāo)準(zhǔn)品多次重結(jié)晶，直到m.p 不變?yōu)橹?/span>

重結(jié)晶操作要點(diǎn)

1、制成飽和熱溶液

視被提純物質(zhì)多少選用適當(dāng)容積的燒瓶，將被提純物質(zhì)放入燒瓶，裝好回流裝置。

在不超過(guò)溶劑沸點(diǎn)的熱浴溫度下緩慢滴加溶劑，并攪動(dòng)，使溶質(zhì)在接近容積沸點(diǎn)時(shí)剛好溶解，立刻停止滴加溶劑

記下溶劑的體積與溶質(zhì)的質(zhì)量

2  （用保溫漏斗）熱過(guò)濾?；蛘邔岬牟际下┒泛蜑V紙用熱溶劑潤(rùn)濕后減壓過(guò)濾

3、結(jié)晶：濾液自然冷卻結(jié)晶（易揮發(fā)溶劑或者易于吸潮的溶劑應(yīng)密閉結(jié)晶）

如果冷至室溫不結(jié)晶，則可以放入晶種或用玻棒擦容器器壁；或放入冰箱進(jìn)行結(jié)晶（注意冰箱溫度應(yīng)該在溶劑凝固點(diǎn)之上）

4、過(guò)濾與洗滌晶體：減壓過(guò)濾、用低溫、少量溶劑洗滌

注意：減壓過(guò)濾應(yīng)該在布氏漏斗完全沒(méi)有液滴滴下為止

5、干燥　

a、低熔點(diǎn)固體、不吸潮物質(zhì)，可以在空氣中干燥

b、高熔點(diǎn),   熱穩(wěn)定的物質(zhì)用烘箱中干燥

c、熱不穩(wěn)定，或吸潮、空氣中不穩(wěn)定的物質(zhì)，低于m.p 20—30℃ ，真空干燥

液體農(nóng)藥  分離提純方法

1、蒸餾法

1）原理：依液體混合物中各組分沸點(diǎn)不同而分離。

2）蒸餾方法分類：

常壓蒸餾適用于b.p較低，在b.p時(shí)不分解的物質(zhì)。

減壓蒸餾適用于b.p較高，或在b.p發(fā)生分解的物質(zhì)。

水蒸氣蒸餾適用于不與水反應(yīng)，b.p較高的物質(zhì)。

2、柱層析法

1）原理：當(dāng)混合物被束縛在色譜柱的固定相上后，流動(dòng)相自上而下流經(jīng)固定相，帶動(dòng)被分離組分向下移動(dòng)。與固定相作用力大的組分在流動(dòng)過(guò)程中留在了后面，與固定相作用力小的組分在流動(dòng)過(guò)程中跑在了前面，混合物因而被分離。

2）柱層析分類：吸附、分配、凝膠

吸附色譜柱：吸附劑固體表面吸附各種成分

分配色譜柱：惰性載體表面涂高沸點(diǎn)液體，被分離物在淋洗劑與高沸點(diǎn)液體之間溶解分配

凝膠色譜柱：多凝膠填粒、淋洗，凝膠網(wǎng)眼大小篩分不同尺寸的分子

3）柱色譜的幾種技術(shù)指標(biāo)：

a.直徑與長(zhǎng)度比：1：10~1：40（短而粗的柱子，分離快，分離效果差；長(zhǎng)而細(xì)的柱子，分離慢，分離效果好。）

b.色譜柱的分離效果還與吸附劑和洗脫劑的選擇、柱子的裝填質(zhì)量有關(guān)。

3、薄層色譜法

1）薄層色譜是比柱色譜更加應(yīng)用廣泛的分離分析手段。薄層色譜用于分離提純具有簡(jiǎn)單快速的特點(diǎn)，但是其分離容量不及柱色譜大，分離效果也不及柱色譜好。

2）薄層分類：吸附與分配色譜

分配色譜又分正相色譜與反相色譜。

正相：含水吸附劑（固定相），弱極性流動(dòng)相，極性小的移動(dòng)快。

反相：鈍化吸附劑（固定相），強(qiáng)極性流動(dòng)相，極性強(qiáng)的移動(dòng)快。

4、掃集共蒸餾法

1）原理：將試樣用注射器注入事先填入的無(wú)吸附性的填充劑（玻璃棉、玻璃珠、海砂等）的凈化柱內(nèi)，在規(guī)定溫度下，農(nóng)藥和溶劑蒸汽隨氮?dú)饬鬟M(jìn)冷凝管，冷凝后進(jìn)入接收器。脂肪、色素不能汽化的雜質(zhì)沉積在柱內(nèi)填充劑上，使雜質(zhì)得以分離。

本法可用于有機(jī)磷、有機(jī)氮農(nóng)藥的分離提純。

2）構(gòu)成部件：柱溫箱、溫度控制器、載氣流量控制器、自動(dòng)淋洗裝置、凈化柱、冷凝管、冷阱、收集器。

5、低溫冷凍分離法

1）食品中農(nóng)藥殘留的分析，取樣后殘留農(nóng)藥與大量的脂肪、蠟質(zhì)混合在一起，給分離造成困難。

2）由于動(dòng)植物組織中的脂肪、蠟質(zhì)可以在低溫下于丙酮溶液中生成沉淀，將樣品用丙酮反復(fù)萃取，萃取液經(jīng)過(guò)冷凍，過(guò)濾而分離掉脂肪、蠟質(zhì)沉淀，而農(nóng)藥留在丙酮中。

3）冷凍溫度一般在-70℃

6、液相萃取法

1）原理：一組互不相溶的溶劑中溶有某一成分溶質(zhì)。這種溶質(zhì)以一定比例（濃度比）在兩相中分配。兩相中分配比稱分配系數(shù)。利用同組溶劑中各物質(zhì)分配系數(shù)不同或同種物質(zhì)在不同溶劑組中分配系數(shù)不同而分開(kāi)。（選擇合適溶劑，反復(fù)分配）

2）適用農(nóng)藥種類

a.用此法一次性回收率達(dá)60—100%的含氯農(nóng)藥有：2，4—滴甲酯劑，艾氏劑、甲體六六六、乙體六六六、丙體六六六、丁體六六六、硫丹、異狄氏劑、七氯、氯殺螨、丙菌清、P，P`—滴滴滴、 P，P`—滴滴E、O， P`—滴滴銻、三氯殺螨醇、狄氏劑、環(huán)氧七氯、六氯苯、碳?xì)潇`、甲氧滴滴銻

b.用上法回收的有機(jī)磷農(nóng)藥有：谷硫磷、三硫磷、地亞農(nóng)、氮線磷、乙拌磷、殺蟲螟松、亞胺硫磷、馬拉硫磷、甲基一六零五、一六零五、三九一一、磷胺、皮蠅硫磷

7、化學(xué)凈化法

1)殘留農(nóng)藥提取液干擾分析成分很大程度是脂肪與色素?；瘜W(xué)凈化法是使雜質(zhì)與某種試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)除掉或者消擾。

2)最常用的化學(xué)凈化法是用酸處理對(duì)酸穩(wěn)定的農(nóng)藥或用堿處理對(duì)堿穩(wěn)定的農(nóng)藥來(lái)除雜。

酸凈化：用濃H₂SO₄或濃H₂SO₄與發(fā)煙硫酸（1：1）混合液在分液漏斗中處理萃取液，可以除脂肪、色素。

除雜原理：不飽和脂肪，色素中含有C=C，可以和濃H₂SO₄加成生，成可溶于濃H₂SO₄的化合物而除去。

堿凈化：用石油醚淋洗，而耐堿農(nóng)藥有很好的回收率。對(duì)艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑宜用堿凈化。